Патологическая анатомия — СЗГМУ, Лечебное дело
Гистологическое исследование тканей невозможно без применения специальных методов окрашивания, обеспечивающих визуализацию структурных компонентов клеток и межклеточного вещества. Выбор конкретной окраски определяется диагностической задачей: необходимо идентифицировать тип ткани, выявить патологические изменения, обнаружить микроорганизмы или установить химическую природу включений.
По механизму взаимодействия красителя с тканевыми структурами и целевой направленности выделяют:
---
Цель применения: стандартная окраска для первичного анализа всех типов тканей. Позволяет оценить общую архитектонику, клеточную атипию, воспалительную инфильтрацию, очаги некроза.
Принцип: гематоксилин (основной краситель) окрашивает ядра в сине-фиолетовый цвет, связываясь с ДНК и РНК. Эозин (кислый краситель) окрашивает цитоплазму, коллагеновые волокна, эритроциты, секрет в оттенки розового и красного.
Применение в патологии: диагностика опухолей, воспалительных заболеваний, дистрофий. Практически любой биоптат сначала исследуют в HE.
Цель: дифференцировка коллагеновых и мышечных волокон.
Принцип: пикриновая кислота окрашивает мышечные волокна в жёлтый цвет, а кислый фуксин окрашивает коллаген в красный.
Применение: оценка фиброза в органах (цирроз печени, склероз почек), выявление рубцовой ткани, изучение структуры сосудов.
Цель: одновременная визуализация коллагена, мышечных волокон, фибрина, клеточных элементов.
Принцип: коллаген окрашивается в ярко-голубой или синий цвет (анилиновый синий), ядра — в чёрный (гематоксилин), эритроциты и мышечные волокна — в красный.
Применение: гистологическая оценка миокарда (зоны инфаркта, фиброз), почечных клубочков, десмоидных опухолей.
---
Цель: выявление эластических волокон в стенках сосудов, лёгких, коже.
Принцип: резорцин-фуксин связывается с эластином, окрашивая его в чёрно-фиолетовый цвет.
Применение: диагностика эмфиземы лёгких (разрушение эластина), аневризм, эластозов, оценка степени эластофиброза.
Цель: идентификация фибриновых отложений в тканях.
Принцип: фибрин окрашивается в сине-фиолетовый (MSB) или розовый (по Шуенинову) цвет.
Применение: обнаружение тромбов, фибринозного экссудата при пневмонии, фибриноидного некроза при ревматизме, ДВС-синдроме.
---
Цель: выявление нейтральных жиров (липидов) в клетках и тканях.
Принцип: жирорастворимые красители (суданы) растворяются в липидных каплях, придавая им оранжево-красный цвет (Oil Red O — ярко-красный). Обязательно применяются на замороженных (необезжиренных) срезах.
Применение: диагностика жировой дистрофии печени (стеатоз), атеросклеротических бляшек, липосарком, некроза жировой клетчатки.
Цель: выявление ненасыщенных липидов, миелиновых оболочек.
Принцип: осмий восстанавливается липидами, давая чёрный осадок.
Применение: электронная микроскопия, реже — световая (исследование периферических нервов, оболочек).
---
Цель: выявление нейтральных полисахаридов, гликогена, муцинов, базальных мембран.
Принцип: окисление гликолей периодатом до альдегидов, которые затем реагируют с реактивом Шиффа, давая малиново-розовое окрашивание.
Применение: диагностика гликогенозов, муцинозных опухолей (рак желудка, яичников), патологии клубочков почек (болезнь минимальных изменений), оценка базальных мембран.
Цель: идентификация кислых мукополисахаридов (гликозаминогликанов), особенно при рН 2,5 — гиалуроновой кислоты, хондроитинсульфатов.
Принцип: альциановый синий образует солевые связи с сульфатными или карбоксильными группами, окрашивая их в голубой цвет.
Применение: муцинозные железистые опухоли (окраска гоблетовских клеток), диагностика мукополисахаридозов (синдром Гурлера), гиалиновых мембран.
Цель: выявление сульфатированных гликозаминогликанов (хондроитинсульфат, кератансульфат) и тучных клеток.
Принцип: специфическое метахроматическое окрашивание — вместо синего цвета краситель приобретает розово-фиолетовый оттенок в местах расположения кислых мукополисахаридов.
Применение: диагностика мастоцитоза, мукополисахаридозов, хондросарком.
---
Цель: специфическое выявление ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) в ядре.
Принцип: мягкий кислотный гидролиз высвобождает альдегидные группы дезоксирибозы, которые затем реагируют с реактивом Шиффа, давая фиолетово-красное окрашивание. РНК не окрашивается.
Применение: количественная оценка содержания ДНК (например, плоидность опухолевых клеток), выявление телец включения (цитомегаловирус — «совиный глаз»).
Цель: дифференцировка ДНК и РНК.
Принцип: метиловый зелёный связывается с ДНК (ядра — зелёные), пиронин — с РНК (ядрышки, цитоплазма — красные). После обработки рибонуклеазой красное окрашивание исчезает.
Применение: оценка активности синтеза белка (плазмоциты, миеломные клетки), диагностика лимфом.
---
Цель: разделение бактерий на грамположительные (сине-фиолетовые) и грамотрицательные (розово-красные).
Принцип: кристаллический фиолетовый с йодом прочно связывается с пептидогликаном толстой клеточной стенки грамположительных бактерий. Обесцвечивание спиртом удаляет краситель из клеток с тонкой стенкой (грамотрицательные), которые затем докрашиваются фуксином.
Применение: идентификация возбудителя в гнойном экссудате, биопсиях при бактериальных инфекциях.
Цель: выявление кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулёза, лепры, нокардии).
Принцип: карболовый фуксин (красный) проникает в липидную оболочку микобактерий при нагревании, после обесцвечивания кислотой и спиртом краситель не удаляется (кислотоустойчивость). Докраска метиленовым синим создаёт синий фон.
Применение: диагностика туберкулёза (гранулёмы, казеозный некроз), микобактериоза.
Цель: выявление грибов (Pneumocystis jirovecii, Aspergillus, Candida) и аргирофильных волокон.
Принцип: соли серебра восстанавливаются до металлического серебра в присутствии грибной клеточной стенки (полисахариды), давая чёрный осадок.
Применение: пневмоцистная пневмония (цисты окрашиваются в чёрный), выявление гифов в биопсии, ретикулиновых волокон.
Цель: идентификация спирохет (Treponema pallidum — возбудитель сифилиса) и легионелл.
Принцип: импрегнация серебром в кислой среде даёт чёрное окрашивание на светлом фоне.
Применение: биопсии при сифилитическом поражении (глотка, кожа, ЦНС), болезнь Лайма.
---
Цель: выявление специфических белковых антигенов (онкомаркеры, рецепторы, цитокератины, CD-антигены).
Принцип: использование первичных антител, которые связываются с антигеном в ткани. Затем применяют систему детекции (вторичные антитела с ферментом — пероксидазой или щелочной фосфатазой), которая катализирует цветную реакцию (например, коричневое окрашивание DAB, красное — Fast Red).
Применение: определение гистогенеза опухоли (например, цитокератины — эпителиальные опухоли, виментин — мезенхимальные), оценка рецепторов эстрогена/прогестерона в раке молочной железы, диагностика лимфом (CD20, CD3), выявление вирусных антигенов (HBsAg, HPV).
---
Цель: определение активности ферментов в тканях (ацидофосфатаза, щелочная фосфатаза, сукцинатдегидрогеназа, миелопероксидаза).
Принцип: тканевые срезы инкубируют с субстратом; фермент превращает его в нерастворимый окрашенный продукт (например, коричневый при щелочной фосфатазе).
Применение: дифференциальная диагностика лейкозов (миелопероксидаза — положительна в миелоидных бластах), болезней накопления (ацидофосфатаза повышена при болезни Гоше), оценка метаболической активности тканей.
---
Каждая гистологическая окраска имеет строго определённое диагностическое значение. Первичным методом остаётся гематоксилин-эозин, на основании которого ставится морфологический диагноз. Для уточнения природы патологического процесса (фиброз, амилоидоз, муциноз, накопление гликогена, наличие микроорганизмов) применяют дополнительные специальные и гистохимические методики. В современной онкоморфологии ключевую роль играет иммуногистохимия, позволяющая определить молекулярный подтип опухоли и прогноз. Корректное применение арсенала окрасок — основа точной диагностики в патологической анатомии.
Все вопросы раздела: подготовка к экзамену по Патологической анатомии