Методы микроскопии (световая, темнопольная, фазовоконтрастная, люминесцентная, электронная), их особенности и возможности.

Микробиология — ИГМА, Лечебное дело

Таксономия и общая характеристика стафилококков

Таксономическое положение

• Царство: Bacteria
• Тип: Firmicutes
• Класс: Bacilli
• Порядок: Bacillales
• Семейство: Staphylococcaceae
• Род: Staphylococcus

В медицинской практике наибольшее значение имеют три вида:

• Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк)
• Staphylococcus epidermidis (эпидермальный стафилококк)
• Staphylococcus saprophyticus (сапрофитный стафилококк)

Морфология и тинкториальные свойства

• Форма: сферические клетки (кокки) диаметром 0,5–1,5 мкм.
• Расположение: в мазках образуют характерные скопления, напоминающие гроздья винограда (неправильные кластеры) – результат деления в трёх плоскостях.
• Окраска по Граму: грамположительные (фиолетовые).
• Спор и капсул не образуют (у некоторых штаммов S. aureus возможна микрокапсула).
• Подвижность: неподвижны (жгутиков нет).

морфология стафилококков

Культуральные свойства

• Тип питания: факультативные анаэробы, хемоорганотрофы.
• Оптимальная температура: 35–37 °C, pH 7,2–7,4.
• Питательные среды: обычные среды (МПА, МПБ), также элективные – солевые агары (например, желточно-солевой агар (ЖСА), маннит-солевой агар).
• Характер роста:
• S. aureus на ЖСА – выпуклые колонии кремово-жёлтого, оранжевого или золотистого цвета (пигмент стафилоксантин). Вокруг колоний – зона помутнения из-за лецитовителлазной активности (расщепление лецитина).
• S. epidermidis – белые или серые колонии.
• S. saprophyticus – лимонно-жёлтые колонии.

Биохимические свойства

• Каталазоположительны (разлагают H₂O₂).
• Ферментируют глюкозу с образованием кислоты без газа.
• Основной дифференциальный признак: плазмокоагулазная активность (S. aureus вырабатывает коагулазу, переводящую фибриноген в фибрин).
• Другие ферменты: лецитовителлаза, ДНКаза, фосфатаза, β-лактамаза.
• Реакция на маннит: S. aureus ферментирует маннит в аэробных условиях (жёлтая зона на маннит-солевом агаре).

Факторы патогенности S. aureus

| Фактор | Эффект |

|--------|--------|

| Капсула | Антифагоцитарный |

| Коагулаза | Свертывание плазмы, защита от фагоцитоза |

| Каталаза | Инактивация активных форм кислорода |

| β-лактамаза | Устойчивость к пенициллинам |

| Гемолизины (α, β, γ, δ, PVL) | Лизис эритроцитов, лейкоцитов, повреждение тканей |

| Лейкоцидин (в частности PVL) | Гибель нейтрофилов, макрофагов |

| Эксфолиативные токсины (ETA, ETB) | Синдром «ошпаренной кожи» (Ritter’s disease) |

| Токсины синдрома токсического шока (TSST-1) | Суперантиген, массивная активация Т-лимфоцитов, шок |

| Энтеротоксины (A–E, G–Q) | Пищевые токсикоинфекции |

| Адгезины (клетка-связанные белки) | Прикрепление к фибронектину, фибриногену, коллагену |

| Белки A (SpA) | Связывание Fc-фрагмента IgG, уход от опсонизации |

факторы патогенности стафилококка

> [!simple] Простыми словами:

> Стафилококки – это круглые бактерии, собранные в «грозди». Они грамположительные, не образуют спор. Staphylococcus aureus – самый опасный вид: вырабатывает яды – токсины (отравления, синдром токсического шока) и ферменты (коагулаза, гемолизины), разрушающие ткани и защищающие его от иммунитета.

> [!example] Пример:

> Гнойный процесс – стафилококковая инфекция кожи (фурункул, абсцесс). Бактерии размножаются, выделяют коагулазу – вокруг образуется фибринозная капсула, изолирующая очаг. Это даёт им укрытие от фагоцитов.

---

Микробиологическая диагностика стафилококковой инфекции

Материал для исследования

Вид материала зависит от локализации процесса:

• Гной, раневое отделяемое, мокрота, моча, спинномозговая жидкость, кровь (при подозрении на сепсис), испражнения (при пищевых отравлениях), мазки со слизистых (нос, зев).

Этапы лабораторной диагностики

1. Микроскопический метод

• Окраска мазка по Граму.
• Критерий: грамположительные кокки в виде «гроздьев».
• Чувствительность низкая – позволяет лишь сделать предположение, не дифференцирует виды.

2. Культуральный метод (основной)

1. Посев на селективные среды: ЖСА (желточно-солевой агар) или маннит-солевой агар.

2. Инкубация 18–24 ч при 37 °C.

3. Учёт характера колоний:

• S. aureus: золотистый пигмент, зона лецитовителлазы (опалесценция) на ЖСА.
• S. epidermidis: белые колонии без лецитовителлазной активности.
• S. saprophyticus: лимонно-жёлтые.

4. Идентификация чистой культуры (подтверждение вида):

• Тест на плазмокоагулазу (кроличья цитратная плазма + культура) – положительный у S. aureus (образуется сгусток).
• ДНК-азная активность – положительна у S. aureus.
• Ферментация маннита в аэробных условиях – S. aureus даёт жёлтую зону.
• Чувствительность к новобиоцину (диск): S. saprophyticus устойчив (≥16 мм – устойчивость? обычно зона <18 мм), S. epidermidis и S. aureus чувствительны.
• Тест на каталазу (отличие от стрептококков) – всегда положительный.

5. Антибиотикограмма (определение чувствительности к антибиотикам, в частности к метициллину/оксациллину для выявления MRSA).

микробиологическая диагностика стафилококка

3. Серологический метод (вспомогательный)

• Определение антител к стафилококковым антигенам в сыворотке крови.
• Методы: РПГА, ИФА, реакция нейтрализации токсинов.
• Клиническое значение имеет выявление антиальфа-гемолизина (анти-α-гемолизин) – маркер перенесённой или текущей стафилококковой инфекции.
• Диагностическое значение ограничено – используется для подтверждения хронических форм (остеомиелит, эндокардит).

4. Молекулярно-биологический метод

• ПЦР в реальном времени для обнаружения генов:
• nuc (термостабильная нуклеаза S. aureus)
• mecA (ген устойчивости к метициллину)
• Позволяет быстро (2–4 ч) выявить S. aureus и сразу определить MRSA.
• Используется при бактериемии, сепсисе, для внутрибольничного мониторинга.

> [!example] Пример:

> При посеве гноя из фурункула выросли золотистые колонии, тест на коагулазу положительный – диагноз: «золотистый стафилококк». Дополнительно сделали ПЦР на mecA – отрицательно. Значит, штамм чувствителен к оксациллину.

---

Специфическая профилактика стафилококковой инфекции

Активная иммунизация

• Стафилококковый анатоксин (адсорбированный или очищенный).
• Представляет собой инактивированный формалином α-токсин (гемолизин).
• Вводится внутримышечно (планово работникам хирургических отделений, пациентам перед плановыми операциями).
• Стимулирует образование антитоксических антител (антиальфа-гемолизина), которые нейтрализуют основной токсин при инфицировании.
• Аутовакцины (из собственных штаммов пациента) – применяют при хронических рецидивирующих инфекциях (фурункулёз) для стимуляции специфического иммунитета.

Пассивная иммунизация

• Антистафилококковый иммуноглобулин человека (содержит высокие титры антител к α-токсину и другим антигенам).
• Вводится внутримышечно или внутривенно (в зависимости от формы).
• Применяется для экстренной профилактики у новорождённых, у пациентов с тяжёлыми ожогами, после хирургических вмешательств при высоком риске стафилококкового сепсиса.
• Гипериммунная антистафилококковая плазма (содержит антитела от доноров, иммунизированных анатоксином).
• Используется при генерализованных инфекциях.

Бактериофаги

• Стафилококковый бактериофаг (жидкий, сухой, в мазях, аэрозолях).
• Действует избирательно на стафилококки (в т.ч. на MRSA).
• Применяется местно (промывание ран, полостей), внутрь (при энтероколитах) или парентерально (строго по показаниям).
• Может использоваться как альтернатива или дополнение к антибиотикам при непереносимости или полирезистентности.

> [!critical] Ключевой факт:

> Основную защиту от стафилококковой инфекции обеспечивает антитоксический иммунитет (нейтрализация α-токсина). Антибактериальные антителы менее эффективны, поэтому специфическая профилактика направлена в первую очередь на токсин. Самой эффективной мерой профилактики внутрибольничного распространения MRSA остаётся соблюдение санитарно-противоэпидемического режима.

---

Лечение стафилококковой инфекции

Антибактериальная терапия

Выбор препарата зависит от чувствительности штамма:

1. Штаммы, чувствительные к метициллину (MSSA)

• Препараты выбора: оксациллин, цефазолин, цефалексин.
• Альтернатива: ингибитор-защищённые пенициллины (амоксициллин/клавуланат), линкозамиды (клиндамицин), макролиды (эритромицин) – при аллергии.

2. Метициллин-резистентные штаммы (MRSA)

• Препараты выбора: ванкомицин (в/в), тейкопланин, даптомицин, линезолид ( внутрь и в/в).
• Дополнительные: цефтобипрол, цефтаролин (цефалоспорины V поколения), тигециклин (глицилциклин).
• Рифампицин + фузидиевая кислота (комбинированная терапия при остеомиелите).
• Устойчивость к ванкомицину (VISA, VRSA) – крайне редка, требует консультации клинического фармаколога.

Патогенетическая и симптоматическая терапия

• Дренирование гнойников (основной подход при абсцессах, фурункулах – вскрытие и эвакуация гноя).
• Детоксикация (при сепсисе – инфузионная терапия, плазмаферез).
• Кортикостероиды (при синдроме токсического шока – для подавления чрезмерной иммунной реакции).
• Противоаллергические средства (при токсико-аллергических реакциях).

Фаготерапия и пробиотики

• Стафилококковый бактериофаг – местно или внутрь, как дополнение к антибиотикам или при аллергии.
• Кишечные антисептики (энтерофурил) при стафилококковом энтероколите.

> [!critical] Ключевой факт:

> MRSA – главная проблема госпитальной инфекции. При подозрении на тяжёлую стафилококковую инфекцию до получения антибиотикограммы эмпирически назначают антибиотики, активные против MRSA (ванкомицин, линезолид). Нерациональное применение антибиотиков – основная причина роста устойчивости.

---

Итог

Стафилококки – повсеместно распространённые грамположительные кокки, ведущим патогеном является S. aureus, обладающий широким набором факторов патогенности (токсины, ферменты). Основой диагностики служит культуральный метод с тестами на коагулазу и идентификацию вида, дополненный ПЦР для выявления MRSA. Специфическая профилактика включает стафилококковый анатоксин и бактериофаги; основное лечение – антибиотики с учётом резистентности, дренирование гнойных очагов и поддержание иммунитета.

Все вопросы раздела: Подготовка к экзамену по Микробиологии