Споры и капсулы. Методы их выявления.

Микробиология, вирусология — СПбГПМУ, Стоматологический факультет

Споры и капсулы. Методы их выявления.

1. Общая характеристика спор и капсул

Споры (эндоспоры) — покоящиеся формы некоторых грамположительных бактерий (родов Bacillus, Clostridium, Sporolactobacillus и др.), обеспечивающие выживание в неблагоприятных условиях. Это не способ размножения, а форма анабиоза с крайне низким метаболизмом. Химический состав: дипиколиновая кислота (в комплексе с Ca²⁺), кортикальный слой (пептидогликан), керриновая оболочка (кератиноподобные белки, богатые цистеином). Споры термоустойчивы (выдерживают кипячение до 2-4 ч), устойчивы к дезинфектантам, высушиванию и радиации.

Капсулы — слизистый слой, окружающий клеточную стенку некоторых бактерий (пневмококки, клебсиеллы, синегнойная палочка, бациллы сибирской язвы и др.). Химический состав: полисахариды (наиболее часто), полипептиды (у сибиреязвенной палочки — D-глутаминовая кислота) или гиалуроновая кислота (стрептококки группы A). Капсула выполняет функции: защита от фагоцитоза, адгезия, защита от фагов и антибиотиков, депо воды.

> [!simple] Простыми словами: Споры — это «спящая» форма бактерий с очень толстой защитной оболочкой, позволяющая им пережить кипячение и высыхание. Капсула — слизистая «шуба» вокруг некоторых бактерий, которая мешает иммунным клетках уничтожать их.

2. Методы выявления спор

2.1. Окраска по методу Ожешко (модификация Циля-Нильсена)

1. На фиксированный мазок нанести карболовый фуксин Циля, нагревать до появления паров 3–5 мин.

2. Обесцветить 5% раствором серной кислоты или 3% раствором HCl в спирте (10–15 сек).

3. Докрасить метиленовым синим (1–2 мин).

2.2. Окраска по Шефферу-Фултону (Schaeffer-Fulton)

2.3. Окраска по Пешкову

2.4. Фазово-контрастная микроскопия (живые неокрашенные препараты)

2.5. Люминесцентная микроскопия

> [!example] Пример: При диагностике сибирской язвы (Bacillus anthracis) выявление центрально расположенных спор (в виде «барабанной палочки») в мазках из крови или тканей — ключевой диагностический признак. Используют окраску по Ожешко.

3. Методы выявления капсул

3.1. Негативное (контрастное) окрашивание — метод Бурри-Гинса

1. Смешать каплю бактериальной суспензии с каплей туши.

2. Приготовить тонкий мазок (как для толстой капли), высушить, фиксировать не обязательно (можно спиртом или формалином).

3. Докрасить водным фуксином (1–2 мин).

3.2. Метод Гинса-Муромцева

3.3. Метод Михина

3.4. Окраска по Ольту

3.5. Тушевый метод (без окраски бактерий)

3.6. Иммунофлуоресцентный метод (РИФ)

> [!simple] Простыми словами: Капсулу увидеть сложно, потому что она прозрачная. Чтобы она стала видна, её очерчивают тушью (как «негатив») или красят специальными способами, которые окрашивают её вещество.

> [!example] Пример: Для идентификации Klebsiella pneumoniae (возбудитель пневмонии) классическим признаком является выраженная полисахаридная капсула. При окраске по Бурри-Гинсу видны крупные палочки в светлых «капюшонах» на чёрном фоне.

4. Сравнительная характеристика

| Признак | Споры | Капсулы |

|---------|-------|---------|

| Функция | Выживание в экстремальных условиях | Защита от фагоцитоза, адгезия |

| Локализация | Внутриклеточно (эндоспоры) | Внеклеточно (покрывает клеточную стенку) |

| Химический состав | Дипиколиновая кислота + Ca, кортекс, кератин | Полисахариды, полипептиды, гиалуроновая кислота |

| Метаболизм | Отсутствует (анабиоз) | Активный синтез |

| Устойчивость | Термо-, химио-, радиорезистентность | Чувствительна к нагреванию, ферментам |

| Выявление | Специальные окраски (с нагреванием) + фазовый контраст | Негативное окрашивание + иммунофлуоресценция |

5. Клиническое значение

> [!critical] Ключевой факт: Споры выявляют только с предварительным нагреванием красителя из-за непроницаемости оболочки. Капсулы выявляют негативным контрастированием (тушь — фон) или специфическим окрашиванием капсульного вещества; классический метод — Бурри-Гинса. Споры — признак грамположительных бацилл и клостридий, капсулы — как грамположительных, так и грамотрицательных бактерий.

---

Итог. Споры и капсулы — структурные компоненты бактериальной клетки с разными функциями и методами выявления. Споры требуют окраски с нагреванием (Ожешко, Шеффер-Фултон) или фазово-контрастной микроскопии. Капсулы визуализируются негативным контрастированием тушью (Бурри-Гинс) или иммунофлуоресценцией. Знание этих методов необходимо для идентификации возбудителей и оценки их факторов патогенности.

Все вопросы раздела: Подготовка к экзамену по Микробиологии, вирусологии