Патологическая анатомия — СЗГМУ, Лечебное дело
Патологическая анатомия изучает структурные (морфологические) основы болезней. Основными объектами исследования являются:
Фиксация — это консервация тканей с целью максимального сохранения прижизненной структуры клеток и предотвращения аутолиза (самопереваривания) и гниения.
1. Формалин (10% нейтральный забуференный формалин):
2. Спирты (этиловый, метиловый):
3. Фиксаторы на основе солей тяжелых металлов (жидкость Ценкера, жидкость Буэна):
4. Специализированные фиксаторы (для электронной микроскопии, гистохимии):
1. Свежесть материала: Фиксацию проводят немедленно после забора (не позднее 15–30 минут), иначе начинается аутолиз.
2. Достаточный объем фиксатора: Соотношение объёма ткани к объёму фиксатора должно быть не менее 1:10 (на один грамм ткани — 10 мл раствора). При недостатке фиксатора центральные участки остаются нефиксированными (зона некробиоза).
3. Размер кусочков: Толщина кусочка не должна превышать 0,5–1,0 см (для формалина), так как скорость пенетрации ограничена. Мелкие биоптаты (игольные) фиксируются целиком, крупные органы (лёгкое, печень, селезёнка) — режут пластинами 0,5–0,8 см.
4. Температура и время: Обычно фиксация проводится при комнатной температуре. Для формалина стандартное время — 12–24 часа (достаточно для 3–5 мм кусочка). При низкой температуре фиксация замедляется, при высокой — ускоряется, но возможна денатурация.
5. Предотвращение деформации: Мягкие ткани (мозг, кишечник) перед фиксацией помещают на фильтровальную бумагу или картонный планшет, чтобы избежать смятия. Полые органы (желудок, матка) фиксируются расправленными на пробковой доске иглами.
6. Маркировка: Каждый кусочек ткани должен быть промаркирован (номер, фрагмент) в соответствии с сопроводительным направлением. Допускается использовать метиленовый синий или тушь для метки на капсуле/серозе.
7. Использование ИГХ и ПЦР: Для иммуногистохимии формалин должен быть строго нейтральным, время фиксации не более 48 ч (иначе блокируются антигены). Для полимеразной цепной реакции (ПЦР) и исследования РНК предпочтителен фиксатор без формальдегида (спирты, РНК-стабилизаторы).
Замораживающий микротом (криостат) — это прибор для получения гистологических срезов (толщиной 1–20 мкм) из свежезамороженных тканей без их предварительного проведения через спирты и парафин. Срез выполняется лезвием в охлаждённой камере (температура от –20°C до –40°C).
1. Срочные интраоперационные (экспресс-) биопсии. Самый частый сценарий. Во время операции хирург забирает ткань (например, лимфоузел, край резекции, образование в яичнике). В течение 20 минут патоморфолог готовит срез на криостате, окрашивает гематоксилином и эозином (быстрая окраска) и даёт ответ: есть ли опухолевые клетки, каков характер процесса (доброкачественный/злокачественный), достаточен ли объём удалённой ткани (статус краёв резекции).
2. Выявление жиров и липидов (гистохимия липидов). При фиксации в формалине и проводке через ксилол (растворитель жиров) липиды теряются. На криостатных срезах можно выявить:
3. Ферменто-гистохимия (выявление активности ферментов). Многие ферменты (например, сукцинатдегидрогеназа, кислая фосфатаза) инактивируются при формалиновой фиксации и проводке. Для их обнаружения используют криостатные срезы без фиксации или с минимальной фиксацией.
4. Иммуногистохимия (ИГХ) с антителами к лабильным антигенам. Некоторые антигены разрушаются при длительной формалиновой фиксации и высокой температуре проводки. Криостатная ИГХ позволяет выявить их лучше (хотя рутинно для большинства антигенов парафиновые срезы предпочтительнее из-за лучшего гистологического качества).
5. Микробиологическое исследование (бактериоскопия). В замороженных срезах можно визуализировать микроорганизмы (например, микобактерии туберкулёза при окраске по Цилю-Нильсену) для быстрого скрининга.
| Преимущества | Недостатки |
| :--- | :--- |
| Быстрота (результат через 10–20 мин) | Худшее гистологическое качество (кристаллы льда искажают структуру, артефакты замерзания — «кристаллы льда») |
| Сохранение липидов, ферментов, лабильных антигенов | Невозможность длительного хранения замороженных блоков |
| Возможность оценки краски без проводки | Фрагментация тканей при замерзании (особенно жировой, богатой водой) |
| Прямое использование для ИГХ (раствор антител быстро проникает) | Криостатные срезы менее долговечны (на стёклах) и хуже демонстрируют детали ядер и соединительной ткани |
Вывод: Замораживающий микротом является незаменимым инструментом в срочной хирургической диагностике и в тех методиках, где ключевую роль играет сохранение молекул, растворимых в органических растворителях (липиды, низкомолекулярные антигены, ферменты).
Все вопросы раздела: подготовка к экзамену по Патологической анатомии